秒速时时彩

免疫荧光
                                                          免疫荧光实验流程

一.脱蜡至水

1.     二甲苯Ⅰ(8min)

2.     二甲苯Ⅱ(8min)

3.     无水乙醇和二甲苯1:1(5min)

4.     无水乙醇(3min)

5.     95%乙醇(3min)

6.     85%乙醇(3min)

7.     75%乙醇(3min)

8.     PBS3

二.抗原修复

EDTA抗原修复液修复。

抗原修复100  20min ; 自然冷却至室温。

三.PBST2遍,PBS1遍。每次5min。

四.用30%H2O2和甲醇配制3%H2O2溶液。每张切片加1滴,室温下孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS3遍。

五.封闭  3-5%BSA或者1-2%FBS封闭30min

六.除去封闭液,每张切片加1滴或50μl的第一抗体,室温下孵育60分钟或4℃过夜,建议参见每种抗体的说明书。

   抗体稀释液: 1%FBS溶液(可以加0.01%叠氮钠)

七.洗一抗。PBS3遍,每次5min。

八.孵二抗2h(室温)FITC标记 山羊抗小鼠二抗1:500CY3标记的山羊抗兔二抗1500

九.洗二抗   PBS3遍,每次5min

十.擦干标本边缘水分,加DAPI1ug/ml5min

十一. 把片子放PBS里,取一张擦干水分,加moutingsigma M1289,盖上盖玻片,指甲油封片。