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免疫组化

  

           免疫组化实验步骤

1.包埋好的标本用切片机切石蜡切片3um

2.经60℃烘片1小时

3.二甲苯Ⅰ脱蜡10分钟

4.二甲苯Ⅱ脱蜡10分钟

5.梯度酒精复水:100%酒精5分钟,100%酒精5分钟,95%酒精5分钟,80%酒精5分钟,自来水冲洗 5分钟

6.进行抗原修复:将切片置于0.1mol/Lph=6。0的枸橼酸液修复液中,沸水浴20分钟,停止加热后自然冷却20-30分钟

7. PBS 3分钟3次,组画笔画圈,滴加双氧水,孵育20min

8 PBS 3分钟3次,滴加封闭血清封闭1h

9.甩干 ,滴加适宜浓度的一抗置湿盒中4℃孵育过夜

10.用PBS 3分钟×5次洗去一抗

11.甩干,滴加二抗室温置孵育盒中孵育1小时(注意二抗种属,夏季30min,冬季1h

12.用PBS 3分钟×5次洗去二抗

13.甩干,滴加DAB 显色,水冲

14.苏木素染核5min (新配置的苏木素视情况而定)

15。流水冲洗多余的苏木素,分化液中分化1

16。流水冲洗5min

17。梯度酒精复水:80%酒精5分钟,95%酒精5分钟,100%酒精5分钟,100%酒精5分钟,二甲苯Ⅱ透明5min,二甲苯Ⅰ透明5min(如为完全透明,可适当延长时间)

18.用中性树胶封片

19。镜检

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